Guaidó đã nhận được bằng tốt nghiệp trung học vào năm 2000 sau khi sống qua thảm kịch Vargas năm 1999, có khả năng ảnh hưởng đến chính trị của ông, chính phủ Chávez mới không hỗ trợ.[18] Sau đó, ông đã có được giấy phép chuyên môn kỹ sư công nghiệp sau khi tốt nghiệp Đại học Công giáo Andrés Bello vào năm 2007.

Ông tham gia phong trào chính trị do sinh viên lãnh đạo, phản đối quyết định của chính phủ Venezuela không gia hạn giấy phép phát sóng của mạng truyền hình độc lập RCTV. Nhóm này cũng phản đối những nỗ lực cải cách rộng rãi hơn của chính phủ bởi chế độ của Hugo Chavez, bao gồm cả cuộc trưng cầu dân ý về hiến pháp năm 2007.[19]

Guaidó, cùng với các nhân vật chính trị như Leopoldo López, trở thành thành viên sáng lập của đảng chính trị Ý chí Nhân dân nổi tiếng năm 2009.[20]